碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(alkaline phosphatase antialkaline phosphatase, APAAP)免疫组化技术以其特异性强、敏感性高、 不易受内源性酶干扰等优点， 广泛应用于细胞表面标记, 肿瘤抗原、 微生物抗原等的研究［1］。 免疫组化法的核心试剂是APAAP 复合物。 常规 APAAP 复合物为液体, 其稳定性、 储存及运输都受到一定的限制。

本文比较了APAAP复合物的保护剂的不同配方, 并对复合物冻干品的保存期及溶解后的效果进行了观察。 

1材料和方法

1.1保护剂的种类及配制牛血清白蛋白(BSA, Sigma进口分装)配成每毫升 APAAP 液中含 BSA为6 mg, 9.6 mg和12.6 mg 3种浓度。 蔗糖(AR, 北京化工厂产品)配成5％, 10％, 20％和40 ％ 4种浓度。 20％甘露醇(河北石家庄鹿泉制药厂产品)配成每毫升中含20％甘露醇150 μl。 将以上各种溶液分装于小塑料管内, 采用西德生产的ALPHA 16 冻干机冻干。

1.2试剂APAAP 复合物, 由本室制备［2］。 制备方法见参考文献［1］。 抗副流感病毒2型(PIV2) mAb, 抗腺病毒7型(AdV7) mAb， 均由本室制备［3,4］。

1.3基质片的制备PIV2 以BHK21细胞复制; AdV7以人胚肾细胞复制。 玻片的上行孔涂布 感染病毒的细胞， 下行孔涂正常细胞。 电风扇吹干, 丙酮固定, 吹干后用塑料膜封装, 放-20℃冰箱保存备用。

1.4方法将3种不同的保护剂, 不同浓度的 APAAP 冻干品, 冻干后置于不同温度(25 ℃, -20℃)、 不同时间, 以及冻干剂溶解后于4℃保存不同时间, 分别观察在 APAAP技术染色中的效果。 APAAP 染色技术按我室常规方法进行［2］。 结果判定, 以液体 APAAP 复合物染色为标准, 呈玫瑰红者为“”, 呈深玫瑰红者为“”, 呈淡粉色者为“+”, 无色者为“-”。 

2 结果

实验结果表明, 加有不同浓度保护剂冻干品的液体 APAAP 复合物的活性， 优于不加保护剂冻干品的液体 APAAP 复合物, 以加入BSA 或蔗糖(20％,40％)的效果为佳(表1)。 冻干品放于-20℃冰箱保存, 分别在1, 3, 6, 9和12个月进行 APAAP 染色检测, 效果稳定不变。 将9.6 mg／ml, 12.6 mg／ml 的 BSA和20％,40％ 的蔗糖冻干品与液体APAAP 复 合物放室温5 d 后， 液体APAAP复合物的活性明显下降, 而冻干品放于室温14 d, 染色效果未见下降。 将冻干品溶解成工作液与液体 APAAP 复合物同时放入4℃冰箱观察其稳定性, 发现加 BSA (9.6 mg／ml)或蔗糖(20％)保护剂的 APAAP 复合物冻干品溶解成工作液后, 在4℃ 冰箱的保存时间明显延长。